准确、定量监测内源性蛋白表达及其动态变化，是现代药物发现和机制研究的核心需求。HiBiT-KI 系统将 11 个氨基酸的 HiBiT 标签引入目标蛋白，当其与 LgBiT 互补片段和底物结合后，可形成稳定的 NanoBiT® 荧光素酶，实现从活细胞到裂解液的高灵敏度定量检测。本文以多种 HiBiT-KI 细胞系为例，介绍该技术优势和应用场景。
HiBiT 标签原理：HiBiT 是一种 11 个氨基酸的微型标签，可与 LgBiT 高亲和力结合。形成的复合物构成具有活性的 NanoBiT 酶，在底物存在时产生发光信号。
HiBiT 敲入方法：利用 CRISPR/Cas9 介导的同源重组，将 HiBiT 序列精准整合至目标基因 C 端，从而保留内源性表达和蛋白功能。
HiBiT 敲入后，发光信号可直接反映内源性蛋白表达变化。由于其为内源性敲入，可真实反映细胞内蛋白降解和稳定性动态，为研究降解机制提供可靠平台。
HiBiT-KI 技术应用：
- 致癌突变：KRAS-G12C/G12D/G13D（MIAPaCa2、HCT116-HiBiT）—— 实时监测 KRAS 半衰期，评价共价抑制剂对突变 KRAS 稳定性的影响。
- 代谢调控：LDHA（293T-HiBiT）—— 动态追踪 FX11 衍生 PROTAC 处理下的降解曲线；高通量筛选代谢重编程抑制剂。
- 表观遗传调控：EZH2、PRMT5（多细胞系 HiBiT）—— 实时捕获抑制剂处理下组蛋白甲基转移酶降解速率，分析表观遗传调控与耐药之间的联系。
- 降解剂评价：GSPT1（293T-HiBiT，分子胶 CC-885）、BTK（TMD8-HiBiT，PROTACs NX-2127/NX-5948）—— 比较不同降解剂的 DC₅₀ 和动力学；发光信号可直接呈现效率差异。
HiBiT-KI 细胞系凭借快速、可定量和宽动态范围等优势，正成为靶点功能研究和小分子药物发现的重要平台。该系统可真实揭示内源性蛋白表达与降解动态，为机制研究和候选分子评价提供全流程加速支持。
HiBiT 产品与服务列表：
- 现货 HiBiT-KI 报告细胞系：KRAS-G12C、KRAS-G12D、KRAS-G13D、LDHA、GSPT1、IRAK3、ELAVL1、GRK2、VAV1、PRMT5、BTK、EZH2、FYN、STAT3α/β、ESR1、AR、KRT80、BRD4、IKZF3 等。
- 定制敲入服务：在任意细胞系中进行 HiBiT、NanoLuc、HaloTag 等内源性敲入。
- 表型/功能检测：发光定量、蛋白降解动力学、快速 PPI 筛选。
- 数据分析支持：剂量-反应曲线绘制、IC₅₀ 计算和机制验证。
案例研究：
