引言
在 AACR 专题会议“Expanding and Translating Cancer Synthetic Vulnerabilities”上，Faith C. Fowler 团队公布的最新研究显示，MSI-H 细胞在长期暴露于 HRO761 和两种新型 WRN 抑制剂后，会在 WRN 解旋酶结构域内产生多个点突变。这些突变可直接破坏抑制剂结合，从而驱动耐药产生。这一发现提示，亟需开发能够克服耐药的第二代 WRN 抑制剂，并建立相应实验模型。基于这些发现，我们建立了 WRN-MutCell 平台，利用 CRISPR/Cas9 技术将不同耐药相关突变精准导入内源性 WRN 基因，为新一代 WRN 抑制剂的分子优化和功能验证提供有力工具。
关于 WRN 靶点
Werner 综合征蛋白（WRN）是 RecQ 家族中的关键 DNA 解旋酶，在复制叉重启、基因组稳定性维持以及端粒功能保护中发挥重要作用。在 MSI-H 肿瘤中，错配修复缺陷会导致异常 DNA 二级结构累积，从而形成对 WRN 解旋酶活性的显著依赖。因此，抑制 WRN 功能可触发合成致死效应，选择性清除 MSI-H 肿瘤细胞。
生物学功能
· 复制叉维持：在 BRCA2 缺陷细胞中，WRN 依赖其 ATPase 和解旋酶活性促进复制叉重启，并抑制 MRE11 介导的复制叉降解，从而维持基因组稳定性。
· 解旋酶核心结构：WRN 解旋酶核心区域由翼状螺旋（WH）结构域和 ATP 结合口袋组成。I852 残基位于关键 α 螺旋中；I852F 突变可改变酶活性，并重现耐药相关表型。
疾病相关性
· MSI-H 肿瘤中的合成致死依赖：WRN 在多种 MSI-H 实体瘤中表现出合成致死依赖性，包括结直肠癌、胃腺癌和子宫内膜癌，使其成为精准肿瘤治疗中的新兴靶点。
· 药物敏感性与联合策略：抑制或缺失 WRN 可显著提高 MSI-H 肿瘤对 DNA 损伤反应靶向药物（如 PARP 抑制剂）的敏感性，为联合治疗策略开发提供强有力的机制依据。
当前开发格局
· HRO761（诺华）：首个进入临床开发阶段的非共价 WRN 抑制剂。目前处于 I 期临床试验（NCT05838768），主要靶向 MSI-H 结直肠癌及其他 MSI-H 实体瘤。
· NTX-452（Nimbus Therapeutics）：新一代非共价 WRN 抑制剂，在临床前模型中展现出强合成致死活性，计划于 2025 年上半年启动临床。
· VVD-133214：通过化学蛋白质组学策略发现的共价变构 WRN 抑制剂，已推进至临床候选阶段。
· RO7589831：由美国国家癌症研究所（NCI）支持的 WRN 抑制剂项目，临床开发聚焦多种 MSI-H 实体瘤。
总结
HCT116-WRN-I852F-KI 细胞系可准确重现 MSI-H 肿瘤中观察到的 WRN 依赖性合成致死表型，是研究 WRN 抑制剂的重要模型。该细胞系可广泛应用于：
· 耐药机制研究：阐明 WRN 相关突变如何介导抑制剂疗效丧失，从而促进第二代克服耐药 WRN 抑制剂开发。
· 新药筛选与评价：为 WRN 靶向化合物的药效验证和优先级筛选提供稳健可靠的平台。
· 联合策略优化：系统评估 WRN 抑制剂与 PARP 抑制剂等 DNA 损伤反应药物的联合潜力，加速精准治疗策略开发。
WRN-MutCell 平台：产品与服务
· HCT116-WRN-mut-KI 细胞系——体外验证数据
· HCT116-WRN-mut-KI 细胞系——体内验证数据
1、HCT116-WT
2、HCT116-WRN-C727A
3、HCT116-WRN-C727A
4、HCT116-WRN-C727S
5、RKO-WT
6、RKO-WRN-C727S
摘要
我们近期利用 CRISPR 技术将多种耐药相关突变精准导入内源性 WRN 基因，开发了一组 HCT116-WRN 突变细胞系。结合此前建立的 HCT116-WRN-C727S/A-KI 和 RKO-WRN-C727S-KI 模型，这些细胞系共同构成了一个完整平台，可真实重现 MSI-H 肿瘤对 WRN 解旋酶活性的合成致死依赖。
该平台不仅支持高通量药物筛选，还可用于耐药机制解析，并系统评价新一代 WRN 抑制剂及联合治疗策略。
